2)取l5ml试管，加入2—4mL l%甲基纤维(22-37℃)，放6—7粒玻璃珠及

250mg羟基铁粉，

  ：3)将全血倒人15ml试管中，上海亲子鉴定做好标记，盖紧试管塞。在室温中摇荡10—15分

钟。用磁铁使铁粉沉于管底，放入培养箱静置15分钟。

    4)在室温下上海亲子鉴定取3ml淋巴细胞分离液(I_SND加入lOmL的试管中。将上清液转

移并层叠于LSM上，2000r/min水平离心20分钟。

    5)吸出界面白环层，移入lOml离心管，管中加入50/ Fcs-McCoys液，混合后

1 600r/min离心8—10分钟。

    6)根据分型需要选用合适步骤：①若作HLA-A、B、C分型，倒去上精液，在管

中注入s~6 Fcs-McCoys液，混合后800r/min离心4分钟，弃上清液，用Terasaki

液调节细胞浓度到2.0×106个/ml。②若作T、B细胞分离，加入0.5～。．7ml，

20% Fc s-McCoys液，混合后进一步进行T、B细胞分离。

    Z．T、B细胞分离分离T、B细胞可进行I-ILA-DR、DQ分型。

    1)从37aC培养箱中取出用20% Fcs-McCoy液预温的尼龙柱，标上样品工

作号。

    2)将上述混悬细胞液，用滴管加入尼龙柱，让液体自然流出。

    3)收集洗脱的B细胞悬液，lZOOr/min离心2分钟。

    4)弃上清泼，用Terasaki液词细胞浓度至2.0×106个/ml，用于HLA-DR、

DQ分型点板。